产品货号：
MT3213
中文名称：
SCD DNA聚合酶
英文名称：
SCD DNA Polymerase
产品规格：
250U
发货周期：
1～3天
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SCD DNA聚合酶是一种具有强链置换活性的新型耐热DNA聚合酶。该酶具有Phi29和Bst DNA聚合酶的链置换活性和持续合成能力，并可耐受90℃的高温(短暂耐受92℃)。这些特性使得该酶成为PCDR（Polymerase Chain Displacement Reaction）的最佳用酶。此外，该酶可用于LAMP、tHDA、RCA以及NGS文库的构建。该酶具有5'-3'的聚合酶活性、5'-3'的链置换活性、该酶无5'-3'的外切酶活性，扩增速度为2kb/min、在70℃具有最佳活性。
SCD DNA聚合酶采用了独特的电子重构架技术，提高了该酶对乙醇、胍盐、肝素、血清、植物多糖多酚的耐受性。
1U指在70℃条件下，30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。
等温扩增、LAMP、热变性LAMP、tHDA和RCA、PCDR、全基因组测序、单细胞测序、NGS文库构建。
| 组分 | 规格 |
| SCD DNA聚合酶(10U/μL) | 25μL |
| 5×SCD Pol Buffer | 1.25mL×2 |
| 100mM Mg2+ | 1mL |
保存：-20℃，有效期2年。
1×SCD Pol Buffer中包含2mM Mg2+、4%甘油及其它缓冲盐。
图1．以不同数量级的P72质粒为模板进行PCR和PCDR扩增，引物分别为Inner Primer，Out Primer，Inner+Out Primer，产物1为Out Primer F/R(248bp)，产物2为Inner Primer F/Out Primer R(200bp)，产物3为OuT Primer F/Inner Primer R(164bp)，产物4为Inner Primer F/Inner Primer R(111bp),1-5分别为10e5/10e4/10e3/10e2/10的P72质粒，Marker为DNA Marker 10,000。说明：应用SCD DNA聚合酶采用四引物的PCDR的灵敏度为标准PCR的10倍左右。
一、PCDR的扩增应用
- 反应体系：
成分 用量 5×SCD Pol Buffer 5μL SCD DNA聚合酶(10U/μL) 0.05μL dNTP Mixture (10mM each) 0.5μL Inner Primer each (10μM) 0.25μL Out Primer each (10μM) 0.25μL 模板DNA x μL ddH2O 至25μL - 在PCDR扩增时，SCD DNA聚合酶的使用浓度为0.02U/μL，必要时可在0.02～0.04U/μl之间调整。
- PCDR扩增循环参数
循环数 温度 时间 1st Cycle 92℃ 30s 25-35 Cycles 90℃ 10s 50～60℃ 10s 70℃ 2kb/min Last Cycle 70℃ 2min - SCD DNA聚合酶的耐热性低于常规的Taq酶和pfu酶，该酶在92℃以上的温度会逐步失活，因此在PCDR的扩增中，第一步的预变性时间不超过1min（推荐参数为30s），过长的时间会导致酶活大幅下降。
二、LAMP扩增应用
- 反应体系：
成分 用量 5×SCD Pol Buffer 5μL 100mM Mg2+ 1μL SCD DNA聚合酶(10U/μL) 1μL dNTP Mixture (10mM each) 3μL 10×LAMP Primer 2.5μL 模板DNA x μL ddH2O 至25μL - 10×LAMP Primer:16μM FIP/BIP;4μM LPF/B;2μM F3/B3。
- 在使用SCD DNA聚合酶进行LAMP扩增时，推荐的酶浓度为0.4U/μl，通常可以在0.2～0.8U/μl之间调整。
- 1×SCD Pol Buffer含2mM Mg2+，在LAMP扩增中，再额外补充4mM Mg2+。
- 10×LAMP Primer:16μM FIP/BIP;4μM LPF/B;2μM F3/B3。
- LAMP扩增参数
过程 变性后恒温扩增 恒温扩增 预变性 92℃ 30s 无 恒温扩增 70℃ 30～60min - 在使用SCD DNA聚合酶进行LAMP扩增时，由于SCD酶的耐热性远高于Bst系列的聚合酶，因此允许在恒温扩增前，采用高温（92℃）下的变性步骤。这一特性有助于粗样本的裂解，更有效的释放核酸。
- 在恒温扩增阶段，通常建议的反应温度为70℃，必要时可在65～72℃间调整。
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